核酸檢測產(chǎn)品琳瑯滿目，如和挑選一款好用的核酸檢測產(chǎn)品？回答完如下幾個問題你心中自然就有答案。

1.核酸提取or免提?。?br /> 2.化學提取or物理超聲破碎提?。?br /> 3.手動、半自動、全自動？
4.等溫or變溫？
5.核酸擴增產(chǎn)物泄露風險如和避免？

一、核酸檢測試劑是否需要提取純化？
核酸檢測原理是：采用DNA聚合酶在引物的作用下對模板DNA/RNA(需要反轉(zhuǎn)錄成DNA)進行鏈式反應(yīng)擴增后檢測釋放的熒光信號的多與少來判斷樣本中是否含有待檢測的病原的核酸（DNA/RNA）。

1) 未經(jīng)過提取或純化的樣本可能含有很多影響最終結(jié)果的成分存在：核酸酶（可以降解目的核酸導(dǎo)致假陰）、蛋白酶（可以降解DNA聚合酶導(dǎo)致假陰）、重金屬鹽（導(dǎo)致聚合酶失活導(dǎo)致假陰）、PH過酸或過堿性（可能導(dǎo)致反應(yīng)不能進行）、不完整的RNA(導(dǎo)致反轉(zhuǎn)錄失敗假陰)。

2) 有些樣本直接擴增很難：革蘭氏陽性菌和一些寄生蟲，由于就有較厚的細胞壁等結(jié)構(gòu)，如果不經(jīng)過核酸提取純化過程，免提取試劑盒針對此類樣本時可能會失效。

所以，建議選用配置核酸提取步驟的檢測試劑盒或儀器。

二、化學提取還是物理超聲破碎提??？

一般來說化學提取基本能夠適用大部分樣本的預(yù)處理及提純。但是在細胞壁厚的革蘭氏陽性細菌和一些寄生蟲中同樣存在化學提取不能得到有效核酸模板的情況出現(xiàn)，導(dǎo)致檢測假陰的出現(xiàn)。另外化學提取常采用強堿試劑，如果洗脫不徹底，容易在反應(yīng)體系中引入強堿導(dǎo)致結(jié)果不準。

而超聲破碎采用物理破碎的方式，在人用POCT領(lǐng)域，龍頭企業(yè)賽沛GeneXpert采用超聲物理破碎的方式已經(jīng)有成功先例，并在一些復(fù)雜樣本（比如結(jié)核桿菌）的核酸提取中都占有絕對優(yōu)勢。

所以，建議選用配置核酸提取步驟的檢測試劑盒或儀器，如果有超聲提取模塊為最優(yōu)。

三、手動、半自動、全自動？
這是一個人工成本及工作效率的問題，目前寵物醫(yī)院相對人手不是很足，核酸提取及檢測又是一個需要一定技巧和經(jīng)驗的工作，毫無疑問，全自動樣本進結(jié)果出的核酸提取檢測一體機是完美選擇。

四、等溫擴增or變溫擴增？

擴增反應(yīng)是核酸檢測環(huán)節(jié)，這個環(huán)節(jié)涉及的專業(yè)技術(shù)相對比較復(fù)雜，總體來說都是利用酶對核酸進行擴增放大，放大過程中對釋放的熒光信號或者嵌入的熒光信號進行檢測，一般來說熒光信號越早出現(xiàn)，表示樣本中目的基因含量越大。

恒溫擴增是在恒定溫度下進行核酸擴增，而變溫擴增是嚴格按照變性–退火–延伸進行循環(huán)擴增。恒溫擴增的時間一直在進行，而變溫擴增的時間受到儀器升降溫度的速率影響差異較大（目前很多廠家已經(jīng)能做到30分鐘左右擴增40個循環(huán)）。

如果實驗室條件較好，分區(qū)嚴格，按理來說兩者準確性差異并不會很大。但是變溫擴增相對來說會在更短的時間內(nèi)合成更多的核酸產(chǎn)物。對于沒有嚴格分區(qū)及專業(yè)培訓人員的實驗室，發(fā)生核酸氣溶膠泄露的風險會更大，一旦泄露假陽性就出現(xiàn)，而且極難消除。

另外，恒溫擴增在樣本復(fù)雜時也更容易出現(xiàn)非特異性擴增（相對反應(yīng)的溫度更低，相對而言延伸溫度越高引物結(jié)合特異性越好）。

就目前技術(shù)而言，變溫擴增相對更加靠譜。

五、核酸擴增產(chǎn)物泄漏風險如何避免？

目前很多廠家選用壓蓋式PCR管作為核酸反應(yīng)管，這種管子，通過摩擦力來密閉，變溫PCR擴增中溫度變性時達到90℃以上，反復(fù)的熱脹冷縮過程對pcr管子的密封性是很大挑戰(zhàn)，壓蓋式pcr管子相對而言是比較容易導(dǎo)致泄漏情況發(fā)生。

最好采用全封閉的試劑盒/管來進行反應(yīng)可以避免反應(yīng)產(chǎn)物泄露的發(fā)生。如果能做到核酸提取和檢測一體的全封閉試劑盒那是最完美不過。

紐太新推出的全自動核酸提取檢測一體機完美具備以上五種最優(yōu)選擇。

1) 核酸提取檢測一體，樣本進結(jié)果出；2) 11個獨立腔室預(yù)置核酸提取試劑及磁珠，核酸提取步驟一步不??；3) 核酸反應(yīng)管內(nèi)全封閉反應(yīng)，無泄露風險 ;4) 超提物理破碎提取，溫和純度高，檢測更準